Кроличье моноклональное антитело к ацетилированному гистону H3-K14 (Q16695/P68431) для Вестерн-блоттинга (WB), ChIP, ИФА (ELISA)

Основные спецификации и параметры продукта

Биологический фон: Функция и локализация гистона H3

• Гистон H3 является основным компонентом нуклеосомы, фундаментальной единицы хроматина, который упаковывает ДНК и регулирует доступ для транскрипции, репликации, репарации и хромосомной стабильности. Нуклеосомы состоят примерно из 146 п.н. ДНК, намотанной на гистоновый октамер (по две молекулы H2A, H2B, H3 и H4).
• Ацетилирование лизина 14 гистона H3 (H3K14ac) — это хорошо охарактеризованный эпигенетический маркер, связанный с активно транскрибируемыми генами и открытыми регионами хроматина. Он катализируется в основном гистонацетилтрансферазами, такими как GCN5/PCAF, и распознается белками, содержащими бромодомен. Связанные ссылки: PMID:16457588, PMID:16185088, PMID:16267050, PMID:17194708
• Канонический гистон H3.1 (кодируемый несколькими генами, включая HIST1H3A и др., SWISS P68431) экспрессируется зависимым от репликации способом во время S-фазы и депонируется по всему геному. Напротив, гистон H3.1t (SWISS Q16695, ген H3-4/HIST3H3) — это специфичный для тестикул вариант, который заменяет канонический H3 во время сперматогенеза.
• И H3.1, и H3.1t имеют высокую степень идентичности последовательностей, включая N-концевой регион, содержащий K14. Иммуноген антитела — синтетический пептид, ацетилированный по K14, — обеспечивает специфическое распознавание этой модификации для обоих вариантов.
• Субклеточная локализация гистона H3 — ядерная, где он преимущественно ассоциирован с хромосомами. Тканевая специфичность H3.1t ограничена клетками семенников, в то время как H3.1 вездесущ.

Экспериментальные рекомендации и технические советы

• Дизайн иммуногена: Антитело было получено против синтетического ацетилированного пептида в районе K14 человеческого H3, что обеспечивает высокую специфичность к ацетилированной форме. Для подтверждения связывания, специфичного к модификации, можно использовать конкурентные анализы с неацетилированным пептидом.
• Вестерн-блоттинг (WB): Гистон H3 мигрирует с молекулярным весом примерно 15 кДа в стандартных условиях SDS-PAGE. Для оптимального обнаружения рекомендуется использовать ядерные экстракты и мягкий кислотный экстрагирование для обогащения гистоновыми белками. Всегда включайте соответствующие положительные и отрицательные контроли (например, клетки, обработанные ингибиторами гистондеацетилаз, и необработанные клетки).
• Иммунопреципитация хроматина (ChIP): Это антитело указано для применений ChIP; однако, в зависимости от целевых геномных регионов и типа клеток, может потребоваться оптимизация сшивки, фрагментации хроматина и концентрации антитела.
• Иммунофлуоресценция/Иммуногистохимия (IF/IHC): Ожидается ядерное окрашивание. Для парафиновых срезов (IHC-P) может потребоваться демаскировка антигена. Проверьте специфичность антитела с помощью блокирующих пептидов или путем сравнения с изотипными контролями.
• Реактивность по видам: Антитело перекрестно реагирует с образцами человека, мыши и крысы из-за высокой консервативности последовательности в районе K14. Для других видов перед использованием проверьте выравнивание последовательностей.
• Общее: Будучи кроличьим моноклональным антителом, оно обеспечивает высокое сродство, воспроизводимость между партиями и низкий фон. Храните при -20°C и избегайте повторных циклов замораживания-размораживания.

CamelBio: Ваш универсальный мост для закупок

CamelBio оснащает производителей диагностических средств, исследовательские лаборатории и академические институты комплексным выбором сырья для IVD, от валидированных пар антител и оптимизированных моноклональных/поликлональных антител до объемных вспомогательных реагентов. Наш портфель продукции включает специализированные реагенты с ацетилированными антителами, такие как это кроличье мАт к ацетил-гистону H3-K14, которое служит надежным инструментом для разработки эпигенетических биомаркеров и исследований хроматина. Помимо стандартных товаров каталога, CamelBio предлагает разработку пользовательских антигенов и поиск редкого сырья для целевых белков, чтобы ускорить ваш конвейер разработки анализов. Сотрудничайте с CamelBio, чтобы оптимизировать разработку вашей продукции от концепции до клиники.